苯并芘固相萃取柱

苯并芘（BaP），又稱(chēng)3，4-苯并芘，是一種常見(jiàn)的高活性間接致癌物，是目前的三大強(qiáng)致癌物質(zhì)之一，照中國(guó)國(guó)家GB2716-2005《食用植物油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》要求，在食用植物油類(lèi)產(chǎn)品中苯并芘的安全*為不超過(guò)10微克/千克。苯并芘固相萃取柱SPE專(zhuān)用萃取小柱

     對(duì)于苯并芘的檢測(cè)，目前各檢測(cè)單位通用的是國(guó)標(biāo)方法，即：《GBT 22509-2008 動(dòng)植物油脂 苯并(a)芘的測(cè)定 反相高效液相色譜法》，其中用到調(diào)整活度后的中性氧化鋁柱――EB27012300活度為Ⅳ級(jí)的的氧化鋁柱，如果自己進(jìn)行裝填，需要經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)進(jìn)行調(diào)整、裝填、測(cè)試、再調(diào)整。連橋生物經(jīng)過(guò)測(cè)試，研發(fā)出直接可用的商品化小柱新品―EB27012300苯并芘專(zhuān)用固相萃取柱！無(wú)需改變實(shí)驗(yàn)方法，可直接進(jìn)行實(shí)驗(yàn)！幫助您節(jié)省了層析柱的準(zhǔn)備時(shí)間， 問(wèn)題迎刃而解！

附實(shí)驗(yàn)方法：本方法參考GBT 22509-2008國(guó)標(biāo)方法：動(dòng)植物油脂 苯并（a）芘的測(cè)定反相高效液相色譜法。

一、 實(shí)驗(yàn)原理

用正己烷溶解油脂樣品，上樣到EB27012300固相萃取柱，去除脂肪酸等，再用正己烷洗脫苯并（a）芘，采用反相高效液相色譜法分離，熒光檢測(cè)器檢測(cè)。

二、試劑與材料

2.1EB27012300固相萃取柱 活度Ⅳ級(jí)，在室溫下避光保存，連橋生物科技

2.2色譜純正己烷；

2.3 苯并（a）芘標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：稱(chēng)取10mg標(biāo)準(zhǔn)品于10mL容量瓶中，用正己烷定容，配制的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為1000mg/L；

3.4 標(biāo)準(zhǔn)工作液：用正己烷稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，稀釋的濃度為10µg/L。

三、儀器和設(shè)備

3.1 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，大于150mL的雞心瓶或圓底旋蒸瓶；

3.2 氮吹儀；

3.3 渦旋混合器；

3.4 2ml進(jìn)樣瓶；

3.5 250µL進(jìn)樣瓶玻璃內(nèi)插管；

3.6 高效液相色譜儀，配自動(dòng)進(jìn)樣器，熒光檢測(cè)器。

四、樣品前處理

4.1稱(chēng)取約0.300g的油樣，用5mL正己烷溶解渦旋混合器上充分混勻。

4.2活化：用約30mL正己烷將氧化鋁柱預(yù)先活化，活化過(guò)程直到氧化鋁柱末端正己烷自然滴下約5mL為止。

在正己烷滴出的過(guò)程中，柱體上部要不斷添加正己烷，千萬(wàn)注意不能讓正己烷低于柱子的上篩板，避免空氣進(jìn)入柱子！將滴出的約5mL正己烷去除，不予收集。

4.3上樣：將溶解好的油樣添加到預(yù)活化好的氧化鋁柱子中，注意操作過(guò)程中上篩板不能干涸。

4.4洗脫：添加80mL正己烷，用150mL的旋蒸瓶接收，直到80mL的正己烷*自然滴出。

操作過(guò)程中不需要加壓或抽真空加快流速，讓正己烷在重力作用下自然洗脫。

4.5將洗脫液在45℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，如果仍然有油滴無(wú)法蒸干，說(shuō)明凈化不*，需要向油滴中添加80mL的正己烷制得新樣，取一根新柱重復(fù)上述凈化過(guò)程；

4.6用總計(jì)10mL的正己烷分三次淋洗旋蒸瓶，合并淋洗液到氮吹管中，氮?dú)獯蹈?。添?00µL的正己烷到氮吹管中，在渦旋混合器上充分混勻。注意氮吹過(guò)程避免氣流過(guò)大，造成液體濺出；渦旋過(guò)程避免正己烷蒸發(fā)。

4.7將上述300µL的正己烷轉(zhuǎn)移至2mL進(jìn)樣瓶?jī)?nèi)插管中，進(jìn)樣分析。

五、色譜條件

流動(dòng)相:乙腈：水 =95：5；

流速：1.0mL/min；

進(jìn)樣量：20µL；

熒光檢測(cè)器：發(fā)射波長(zhǎng)406nm，激發(fā)波長(zhǎng)384nm。

六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論：

6.1結(jié)果：

本方法的采用EB27012300固相萃取柱用于某植物油苯并（a）芘的凈化處理于5ug/kg添加水平可獲得99.49%回收率。

苯并芘固相萃取柱SPE專(zhuān)用萃取小柱