藥品研發(fā)中熱電色譜柱的選擇和流動(dòng)相的優(yōu)化
更新更新時(shí)間：2020-03-18
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分析方法的開(kāi)發(fā)主要包括熱電色譜柱的選擇、流動(dòng)相的選擇、檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇和梯度的優(yōu)化幾個(gè)方面。目前高效液相色譜法(HPLC)多使用反相色譜法，本文主要以反相為例講解。
1.熱電色譜柱的選擇
原料藥生產(chǎn)對(duì)產(chǎn)品的純度和雜質(zhì)含量的要求非?？量?，要求檢測(cè)使用的熱電色譜柱有較高的理論塔板數(shù)，能提供更好的分離度，從而對(duì)可能存在的雜質(zhì)有更大的分離的可能性，所以5um填料的色譜柱長(zhǎng)要250mm，3.5um填料的柱長(zhǎng)要150mm，基本上都是各個(gè)粒徑柱長(zhǎng)長(zhǎng)的。喜歡近兩年新出的亞二微米填料的色譜柱，50mm柱長(zhǎng)就能提供很高的理論塔板數(shù)，而且柱長(zhǎng)和粒徑小了，流速增加很多，能節(jié)省很多的分析時(shí)間，極大的提高工作效率。一般選用直徑為4.6mm或3.0mm的柱子，太細(xì)了可能會(huì)增大柱外效應(yīng)。填料的孔徑對(duì)于小分子合成藥物不需要考慮，普通的分析柱都在100A左右，能滿足分析檢測(cè)的需要。對(duì)于API分析方法開(kāi)發(fā)，一般要求必須做色譜柱的篩選實(shí)驗(yàn)，少使用三種不同類型的色譜柱，每種類型三只，要來(lái)自于不同廠家。
三種類型包括：1)普通的C18或相應(yīng)的C8色譜柱，如Waters的SymmetryC18或C8，YMC的PackProC18或C8，Agilent的RXC8等，其它公司如菲羅門(mén)和熱電也有相應(yīng)的色譜柱；
2)封端處理的或者極性嵌入型色譜柱，如Waters的SymmetryShieldRP18或RP8，XTerraRP18或RP8，YMC的ODSAQ，Agilent的ZorbaxSBAQ等，其它公司如菲羅門(mén)和熱電也有相應(yīng)的色譜柱；
3)填料用其它官能團(tuán)修飾過(guò)的色譜柱，如氨基柱、氰基柱、苯基柱等。一般不同類型的色譜柱在選擇性上會(huì)有很大的差異，相同類型的色譜柱生產(chǎn)廠家不同在選擇性上也會(huì)有差異，這個(gè)主要是填料的性質(zhì)和生產(chǎn)工藝決定的，有時(shí)候用一只色譜柱分離不好，除了優(yōu)化梯度和流動(dòng)相外，換一個(gè)廠家的柱子也是一個(gè)很好的選擇。
相同品牌型號(hào)的色譜柱，C18和C8在選擇性上沒(méi)有差異，但是C18保留能力更強(qiáng)，相同的樣品分離度更高，我們一般傾向于選擇用C18。我們?cè)诤Y選色譜柱時(shí)盡量選擇行業(yè)內(nèi)*幾位的廠家，柱子品質(zhì)好，開(kāi)發(fā)分析方法時(shí)能省很多力氣，做出來(lái)的分析方法也有保證。一個(gè)藥從開(kāi)發(fā)到上市可能會(huì)持續(xù)十幾年甚至更長(zhǎng)時(shí)間，廠家有實(shí)力，開(kāi)發(fā)方法時(shí)選定的柱子在若干年以后需要時(shí)還會(huì)有的買(mǎi)，做分析時(shí)重復(fù)性也能保障。多用幾只色譜柱做篩選和分析方法優(yōu)化，能盡大的可能提高分析方法的質(zhì)量，保證檢測(cè)結(jié)果的可信度。
常用的柱子有：Agilent的ZorbaxEclipseXDB-C18、ZorbaxEclipsePlusC18，Waters的SymmetryC18、XTerraRP18、XTerraMSC18等，YMC的柱子有時(shí)會(huì)是不錯(cuò)的備用選擇，菲羅門(mén)的柱子菲羅門(mén)的柱子國(guó)內(nèi)外*較高，但是感覺(jué)柱子壓力高，壽命短，盡量不用，熱電的柱子用的也不少，但沒(méi)什么感覺(jué)。制劑分析方法選擇色譜柱的要求基本和API相一樣，對(duì)于中間體和生產(chǎn)過(guò)程中反應(yīng)跟蹤(IPC)分析方法開(kāi)發(fā)使用的色譜柱，一般會(huì)根據(jù)樣品性質(zhì)直接選取一兩只普通C18或者封端處理過(guò)的色譜柱，簡(jiǎn)化篩選過(guò)程。
